GFP融合基因都是融合的整個基因麽?還是其中的一段?

2016-11-17技術資料

關於GFP融合的蛋白的一些問題,想把GFP基因融合的已有蛋白的後麵,問一下比較弱的幾個問題:
1、GFP融合基因都是融合的整個基因麽?還是其中的一段呢?
2、是不是不能破壞GFP基因的起始ATG啊?
3、需要注意那些方麵的問題恩?
 

融合蛋白的意思是一起轉錄一起翻譯,然後兩個蛋白是黏在一起不是分開的
你的目的蛋白翻譯出來就會在C或N端帶了GFP,看你的質粒怎麽設計的
一般ATG質粒上麵有了(不然就自己設計)
而且多克隆位點都不會在GFP內部所以不會破壞GFP的起始密碼子
就按照普通的表達蛋白的克隆做就行了
 
 
意思就是:我直接在要表達蛋白的C端按照不移碼原則連接上GFP就可以了,是這樣吧!!!多謝了!!
 
你的質粒不帶GFP的嗎?如果自己連,注意不要把poly A信號加在兩個之間了,否則就杯具
 
有現成的GFP載體,直接連到clone位點就ok了,如果重新構建,一般注意是連到基因的N terminal和C terminal會有不同的效果,所以,一定要有control作對照,還有不要破壞GFP的起始密碼子
 
對,是自己連。。
 
對照應該怎麽設計呢?就是連在兩端看有分別有什麽影響麽?

有啊,有些蛋白很奇怪的,融合了東西就沒功能了……有的隻能融合在C有的隻能在N……
所以你應該設計,空質粒、插入目的片段的質粒、融合在C、融合在N、隻有GFP的組。
 
阿拉伯芥的ACR11-,ACR12-GFP融合
 
阿拉伯芥的ACR11-,ACR12-GFP融合