熒光定量PCR 如何做到定量呢?

2016-11-28技術資料

來源:轉載網絡 作者: dzwd

我要做RT-qPCR,第一步是提取植物內的總RNA,這裏出現個問題,參考步驟裏邊寫的是取0.1g葉片,這個0.1怎麽取啊?:rol:研磨的時候選用的是液氮,研缽上粘的滿哪都是:shuai:,我糾結了,有做過的嗎?你們用的什麽方法啊!望不吝賜教!!

這個量沒必要那麽精確啦,差不多就行了,反正還要有內參的
 
原來如此!
 

做反轉錄的時候,不同的樣品使用同樣量的RNA就可以啦。然後做PCR時使用同樣量的cDNA做模板,最後,還有內參來矯正模板量差異。


我是這麽理解的,你看對不對哈。我要測定的是RNA表達量,首先得是取相同量的植物葉片,然後看下RNA量的多少,感覺這樣才有意義啊!我先去仔細看看方法步驟吧,自己理解有誤?
 
 
是這樣的,每一步都最好保證同樣量,取葉片時當然也是。不過就算完全一樣的樣品分成兩份來提,得到的RNA的量也會有所差異的。