逆轉錄RNA大與50ng/ul會怎麽樣?

2016-11-28技術資料

逆轉錄的時候體係要求RNA的最大量是 50ng/ul ,大於這個數會有什麽樣的後果???

在做逆轉錄的時候體係要求RNA的最大量是 50ng/ul ,但是加入的量卻遠遠大於這個數。我想知道,如果是大於這個量是不是體係就不能逆轉了?還是超過這個最大限量,它也隻是按50ng/ul進行逆轉錄?????
 
超過這個量,首先是反轉錄酶的能力有限,不能全部RNA都反轉錄,如果用來做定量,結果會不準確(不能保證你需要的特定RNA全部被反轉錄了)。其次,如果加入的體積過大,提取RNA時殘留的一些試劑可能會影響酶活力。
不知道你的cDNA打算拿來做什麽,如果是做PCR,那實在沒必要加過量的RNA啊。
 

不曉得你要來幹什麽。我一般為了省試劑都把這個體係減半了。

 
我是用來做實時熒光定量PCR(QRT-PCR)的。還有想請教高手,我的PCR結果與Western Bolting結果相反。您遇到過這樣的問題嗎?謝謝!

不曉得你要來幹什麽。我一般為了省試劑都把這個體係減半了。
稀釋的時候算錯了。使得加入的劑量遠遠大於實際劑量。我之前也是用給定的體係逆轉錄。得到的cDNA我一般會稀釋10倍之後再用。想請問一下,我稀釋10倍之後會引起結果逆轉嗎!??

我沒遇到這個問題,因為我沒做過
不過培訓qPCR時,公司的人有說過,有時候會有這種情況,不過具體的我記不得了,不好意思啦。
 
逆轉錄的過程
逆轉錄過程